Chapter 7 —— 168 —— selector AAV, met Cas9- of Cas9D10A-blootstelling leidt tot een significante toename van de frequenties van gen-gerichte cellen. De ouabaïneafhankelijke verrijkingsfactor voor gen-gerichte cellen was ongeveer 7,5 keer hoger bij gebruik van Cas9D10A-nickase-afgifte. Belangrijk is dat het combineren van in-linkage selector AAV-transductie met Cas9-nuclease of Cas9D10A-nickase-afgifte leidde tot de grondige eliminatie van donor-DNA dat was geïnserteerd op off-target genomische posities van genoom-bewerkte celpopulaties. Daarom zijn deze proof-of-principle-experimenten die aangeven dat op selector AAV gebaseerde genoombewerking transleerbaar zijn naar protocollen met Cas9D10A-geïnduceerde HDR relevant voor het verder verfijnen en toepassen van DSB-onafhankelijke celengineeringstrategieën. Concluderend kan gesteld worden dat het werk dat in dit proefschrift wordt gepresenteerd, door het onderzoek en de integratie van verschillende virale vectoren en RNA-programmeerbare Cas9-eiwitten, nieuwe inzichten en hulpmiddelen biedt voor het bevorderen van genoombewerking door het verbeteren van prestatieaspecten met betrekking tot de efficiëntie, specificiteit en betrouwbaarheid ervan. References 1. Pacesa M, Pelea O, Jinek M. Past, present, and future of CRISPR genome editing technologies. Cell 2024 187:1076-1100. 2. Doudna JA, Charpentier E. Genome editing. The new frontier of genome engineering with CRISPR-Cas9. Science 2014 346:1258096. 3. Koonin EV, Makarova KS, Zhang F. Diversity, classification and evolution of CRISPRCas systems. Curr Opin Microbiol. 2017 37:67-78. 4. Chen X, Gonçalves MAFV. DNA, RNA, and Protein Tools for Editing the Genetic Information in Human Cells. iScience 2018 6:247-263. 5. Chen X, Rinsma M, Janssen JM, Liu J, Maggio I, Gonçalves MA. Probing the impact of chromatin conformation on genome editing tools. Nucleic Acids Res. 2016 44:6482-92. 6. Liao H, Wu J, VanDusen NJ, Li Y, Zheng Y. CRISPR-Cas9-mediated homologydirected repair for precise gene editing. Mol Ther Nucleic Acids. 2024 35:102344. 7. Chen X, Janssen JM, Liu J, Maggio I, 't Jong AEJ, Mikkers HMM, Gonçalves MAFV.
RkJQdWJsaXNoZXIy MTk4NDMw