Chapter 7 —— 166 —— enkelstrengs AAV-afgifte van HDR-donoren met AdV-overdracht met hoge capaciteit van RGN-constructies leidt tot nauwkeurige genoombewerking in grote fracties van doelcelpopulaties. En het onthulde dat RGN-geïnduceerde chromosomale DNA-breuken productieve AAV-vectortransductie bevorderen, zoals gescoord door transgeenexpressie, vermoedelijk als gevolg van het bevorderen van enkelstrengs naar transcriptioneel competente dubbelstrengs DNA-conversie. Ten slotte wordt in Hoofdstuk 4 verder het cruciale belang onthuld van het gebruik van high-fidelity RGN's voor het minimaliseren van off-target donor AAV-inserties in de vorm van defecte vectorgenomen waarvan bekend is dat ze verpakt zijn in vectordeeltjes [14,15]. Het eerdergenoemde recombinogene karakter van AAV-vectorgenomen, dat ze tot efficiënte HDR-substraten maakt, draagt ook bij aan hun promiscue "vangst" bij on-target en off-target of willekeurige chromosomale DNAbreuken door onnauwkeurige NHEJ-processen [11,12,16,17]. Deze endjoining-processen kunnen verder leiden tot chromosomale insertie van concatemere en subgenomische AAV-soorten, waardoor het bereik van HDR-onafhankelijke omstandergebeurtenissen verder wordt vergroot [11,12,17,18]. Tot slot kunnen AAV-genomen, mogelijk door het nabootsen van DNA-laesies of reparatie-intermediairen, de levensvatbaarheid van cellen aantasten door P53-afhankelijke DDR-activering waarvan de gevolgen naar verluidt bijzonder schadelijk zijn in stamcellen [19,20]. Concluderend geeft een groeiend aantal onderzoeken aan dat er onderscheidende genotoxische en cytotoxische effecten zijn gekoppeld aan respectievelijk chromosomaal geïntegreerde en episomale AAV-DNA-vormen, waarbij de opbouw van deze schadelijke effecten strikt evenredig is met de hoeveelheid AAV-vectorinvoer. Om de tekortkomingen aan te pakken die verband houden met AAVgebaseerde genoombewerking, werd in hoofdstuk 5 een merkervrij coselectiesysteem [21] onderzocht, dat afhankelijk is van de krachtige specifieke remmer van de Na+/K+ ATPase-pomp, ouabaïne. Hiervoor werden
RkJQdWJsaXNoZXIy MTk4NDMw