Chapter 7 —— 165 —— van het gekozen doelceltype [13]. Deze kenmerken komen voort uit de nauwkeurig afgestemde mechanismen die door de ouderlijke virussen zijn ontwikkeld voor de overdracht van nucleïnezuur naar de kernen van gastcellen. In Hoofdstuk 4, geïnspireerd door de complementaire kenmerken van twee verschillende klassen van virale genvrije virale vectoren, namelijk adenovirale vectoren met hoge capaciteit (AdV) en AAV-vectoren (respectievelijk bijvoorbeeld grote vrachtcompatibiliteit en bron van recombinogene HDR-substraten), wordt een dubbel viraal vectorsysteem geïntroduceerd, gekarakteriseerd en getest voor HDR-gemedieerde gen-KIdoeleinden. In dit duale virale vector-genoombewerkingsplatform worden RGN-constructies verpakt in AdV-capsiden; terwijl donor-DNA-sjablonen in AAV-capsiden worden geplaatst. Naast overwegingen over de levering van genoombewerkingstools die verband houden met de uiteindelijke efficiëntie van gen-KI-procedures, zijn er andere parameters om te overwegen met betrekking tot de specificiteit en precisie van donor-DNA-insertie. De specificiteit is het resultaat van het detecteren van donor-DNA-sequenties op de doellocatie; terwijl de precisie kan worden beoordeeld door de frequentie van nauwkeurige HDRafhankelijke DNA-inserties boven onnauwkeurige NHEJ-afgeleide gebeurtenissen vast te stellen. In dit opzicht is de kennis over de relatieve bijdragen van verschillende AAV-donorontwerpen (d.w.z. conventioneel versus 'dubbel gesneden') en structuren (d.w.z. enkelstrengs versus dubbelstrengs) aan de specificiteit en precisieparameters van genoombewerking schaars. Daarom diende het duale virale vectorplatform dat in hoofdstuk 4 werd bestudeerd, naast het bereiken van opmerkelijk hoge gen-KI-efficiënties in getransformeerde, niet-getransformeerde en primaire cellen, als een probe om de relatie te bestuderen tussen de eerdergenoemde AAV-DNA-arrangementen en de specificiteit en precisie van gen-KI en taggingprocedures. Dit onderzoek onthulde dat het combineren van
RkJQdWJsaXNoZXIy MTk4NDMw